Биология

Биология - Изоэлектрическое фокусирование

технология разделения молекул по разнице в их электрических зарядах. Это разновидность зонального электрофореза, которую обычно производят в геле. Белок, который находится в рН-зоне ниже собственной изоэлектрической точки, будет положительно заряжен и будет перемещаться к катоду. В результате перемещения заряд молекулы будет снижаться, а перемещение — замедляться. В результате белки образуют четкие полосы, и каждый белок будет располагаться в градиенте значений рН в соответствии с изоэлетрической точкой. Данная технология дает возможность очень четкого разделения белков, отличающихся по заряду.

Применение

Метод применяют для изучения белков, которые отличаются значениями изоэлектрической точки, то есть соотношением остатков кислых и основных аминокислот. Белки наносят на иммобилизованный градиент рН полиакриламидного или агарозного геля. Изоэлектрическое фокусирование позволяет разделить белки, отличающиеся по изоэлектрическим точкам менее, чем на 0,01. Изоэлектрическое фокусирования является первым этапом в проведении двухмерного электрофореза, при котором белки сначала разделяют по изоэлектрическим точкам, и далее — по молекулярной массе с помощью электрофореза в акриламидном геле.