Биология - Allium test - Микроскопические исследования и статистическая обработка

14 мая 2011


Оглавление:
1. Allium test
2. История метода «Allium Test», преимущества перед другими методами и перспективы
3. Преимущества метода Allium cepa
4. Характеристика лука Allium cepa L., применимость в тестах
5. Методика проведения тестирования
6. Макроскопические исследования
7. Микроскопические исследования и статистическая обработка
8. Статистическая обработка данных



Два микроядра в меристеме Allium cepa, образованные ацентрическими фрагментами

Расчет частоты мутаций

В Allium test для расчета частоты мутаций традиционно применяется метод ана-телофазного анализа частоты хромосомных аберраций. На стадии ана- телофазы регистрируются мутации, связанные с грубым нарушением структуры хромосом, а так же с повреждением митотического веретена или изменением поведения хромосом на веретене деления:

  • отставания хромосом,
  • аберрантные митозы:
    • трёхполюсные митозы,
    • четырёхполюсные митозы,
    • несимметричные митозы.

Рекомендации

При оценке мутагенной активности химических веществ достаточно использовать лишь ана-телофазный анализ, то есть регистрировать мутации в фазах митоза, так как меристемы в течение всего опыта находятся в контакте с воздействующим фактором. Но при изучении мутагенной активности ЭМИ этого оказалось недостаточно, поскольку воздействию излучения корневые меристемы подвергаются лишь некоторый период времени. В промежутках между облучениями происходит преобразование индуцированных в анафазе и телофазе хромосомных фрагментов — клетки выходят из митоза и переходят в интерфазу, а фрагменты становятся микроядрами. В результате эти мутации остаются неучтенными. В связи с этим была предложена модификация метода Allium test, которая позволяет учитывать всю сумму мутаций. На одном препарате было рекомендовано применять ана-телофазный анализ и микроядерный тест. При этом анализируется вся совокупность клеток, что позволяет избежать ложноотрицательных ответов и дает более достоверные результаты .

Расчет митотического и фазных индексов

Расчёт митотических индексов можно проводить на тех же препаратах, что и ана-телофазный анализ. Просматривается от 400 до 600 клеток. Подсчитывается общее количество делящихся клеток и отдельно клетки на разных стадиях митоза.

Обозначение фазы / индекса Характеристика Расчёт индекса
/ MI
MI, % — митотический индекс
Митотический индекс — процент делящихся клеток от общего числа проанализированных клеток.
Mi=\frac\mbox{}\mbox{N}*100%


, где — сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, ана- и телофазы, а N — общее число проанализированных клеток.

П / ПИ

профаза

ПИ, % — профазный индекс
Профазный индекс — процент клеток в профазе митоза от общего числа проанализированных клеток
\mbox{Pi}=\frac\mbox{P}\mbox{}*100%


, где — сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, ана- и телофазы, а P — количество профаз в просчитанных клетках

М / МИ

метафаза

МИ, % — метафазный индекс
Метафазный индекс — процент клеток в метафазе митоза от общего числа проанализированных клеток
\mbox{Mi}=\frac\mbox{M}\mbox{}*100%


, где — сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, ана- и телофазы, а M — количество метафаз в просчитанных клетках

А / АИ

анафаза

АИ, % — анафазный индекс
Анафазный индекс — процент клеток в анафазе митоза от общего числа проанализированных клеток
\mbox{Ai}=\frac\mbox{A}\mbox{}*100%


, где — сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, ана- и телофазы, а А — количество анафаз в просчитанных клетках

Т / ТИ

телофаза

ТИ, % — телофазный индекс
Телофазный индекс — процент клеток в телофазе митоза от общего числа проанализированных клеток
\mbox{Ti}=\frac\mbox{T}\mbox{}*100%


, где — сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, ана- и телофазы, а Т — количество телофаз в просчитанных клетках

А-Т / А-ТИ

ана- телофаза

А-ТИ, % — ана- телофазный индекс
Ана- телофазный индекс — процент клеток в анафазе и телофазе митоза от общего числа проанализированных клеток
\mbox{A-Ti}=\frac\mbox{}\mbox{}*100%


, где — сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, ана- и телофазы, а А+Т — количество ана- и телофаз в просчитанных клетках



Просмотров: 21066


<<< Модельные организмы
Caenorhabditis elegans >>>