Биология - Вестерн блоттинг

09 февраля 2011


Оглавление:
1. Вестерн блоттинг
2. Подготовка образца
3. Гель-электрофорез
4. Перенос на мембрану
5. Блокирование
6. Детекция
7. Анализ
8. Протоколы



Вестерн-блот анализ белков, разделенных при помощи градиентного электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии SDS.

Вестерн блоттинг — аналитический метод, используемый для определения специфичных белков в образце. На первом этапе использует электрофорез белков в полиакриламидном геле для разделения денатурированных полипептидов по длине или по трехмерной структуре белка. Далее белки переносятся на нитроцеллюлозную мембрану или PVDF, затем детектируются с использованием антител, специфичных к заданному белку.

Существует множество коммерческих компаний, специализирующихся на производстве антител к десяткам тысяч различных белков.

Вестерн-блоттинг используется в молекулярной биологии, биохимии, генетике и в других естественно-научных дисциплинах.

Другие сходные методы используют антитела для определения белков в тканях и клетках посредством иммуноокрашивания и иммуноферментного анализа.

Вестерн-блоттинг был разработан в лаборатории Джорджа Старка в Стэнфорде. Название вестерн блот было дано технике У. Нейлом Бурнеттом и является игрой слов от названия Саузерн блоттинг, — методики определения ДНК, разработанной ранее Эдвином Саузерном. Аналогичный метод определения РНК называется нозерн блоттингом, детекция посттрансляционных модификаций белков называется истерн блоттингом.



Просмотров: 14745


<<< Вектор (биология)
Генная пушка >>>