Биология - ПЦР с обратной транскрипцией

09 февраля 2011


Оглавление:
1. ПЦР с обратной транскрипцией
2. Применение



В молекулярной биологии метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией принято обозначать как ОТ-ПЦР. ОТ-ПЦР представляет собой метод амплификации специфического фрагмента рибонуклеиновой кислоты.

Одноцепочечную молекулу РНК превращают в реакции обратной транскрипции в комплементарную ДНК и далее амплифицируют уже одноцепочечную молекулу ДНК, используя традиционную ПЦР. RT-PCR не следует путать с ПЦР в реальном времени, которую также иногда неверно сокращают как RT-PCR.

Описание метода

Для превращения последовательности РНК в комплементарную ДНК используют обратную транскриптазу:

  • 1. Реакция первой цепочки:
    Комплементарная ДНК образуется на матрице мРНК из dNTP ферментом обратной транскриптазой. Компоненты реакции смешиваются с ДНК-праймером и буфером с обратной транскриптазой на один час при 37 °C.
  • 2. Реакция второй цепочки:
    После того как обратная транскрипция закончена и образована cDNA на матрице мРНК, следующие циклы производятся по стандартной методике ПЦР.

После 30 циклов амплификации образуются миллионы копий нужной последовательности.



Просмотров: 8113


<<< ПЦР в реальном времени
Репортёрный ген >>>