Биология - Метод доминантных летальных мутаций у Drosophila melanogaster - Постановка эксперимента

28 мая 2011


Оглавление:
1. Метод доминантных летальных мутаций у Drosophila melanogaster
2. Постановка эксперимента



Для постановки опыта используются линии дрозофилы, которые отличаются очень низкой спонтанной мутагенностью в отношении мутаций некоторых типов, что делает их очень удобными для опытов, имеющих целью выяснение различий эффектов индуцированного мутагененза.

Воздействию фактора подвергаются самцы. При изучении воздействия электромагнитных излучений требуется подобрать емкость из материала с наименьшими отражающими свойствами. Если изучается мутагенное действие химического соединения, то его примешивают в питательную среду в требуемой концентрации. При изучении мутагенной активности воды или почвы, в качестве емкости используют стаканчики, на дно которых наливают 5 мл исследуемой воды. На дно стаканчика помещается металлическая сеточка таким образом, чтобы вода касалась нижней ее поверхности. На сеточку помещают самцов, которые предварительно были посажены на 3-х часовое голодание. Параллельно ставится интактный контроль. По окончании экспозиции самцов их скрещиваются с самками. Скрещивание проводят в чашках Петри на дно которых была залита агаризованная среда. В чашках мухи содержатся трое суток, через сутки отсаживают самцов, через двое суток — самок. Чашки Петри с отложенными яйцами помещают в термостат на пять суток для выхода личинки из яйца. По истечении этого времени проводится подсчет яиц под микроскопом .

Доминантные летальные мутации, которые индуцируются факторами в сперматозоидах, приводят к гибели зиготы или за счёт возникновения в эмбриогенезе, в результате хромосомных аберраций дефицита в геноме, или за счёт различных повреждений, приводящих к блоку редупликации.

ПЭЛ и РЭЛ — это два класса ДЛМ, которые хорошо определяются визуально. Яйца с ПЭЛ коричневого, палевого или жёлтого цвета, а с РЭЛ — белого цвета, и внутри них видны остановившиеся этапы сегрегации эмбриона — белые непрозрачные уплотнения.

Подсчёт ведётся на стадии яйца, то есть считается количество развившихся из яйца личинок и количество неразвившихся яиц. Также при воздействии на мух мутагенами имеется определённая вероятность откладки неоплодотворённых яиц.

Существуют два варианта определения частоты ДЛМ:

  1. Подсчитывается общее количество развившихся и не развившихся яиц. Погибшие яйца считают как количество леталей .
  2. За летали учитываются только ПЭЛ и РЭЛ.
Обозначение Характеристика Расчёт
ДЛМ

Частота ДЛМ

DLM,% — частота хромосомных аберраций и отставаний
Частота ДЛМ — рассчитывается как отношение общего числа отложенных яиц к числу не развившихся яиц .
\mbox{DLM}=\frac\mbox{n}\mbox{N}*100,%

, где n — количество не развившихся яиц, а N — общее число отложенных яиц.


Просмотров: 9106


<<< Метод ДНК-комет
Метод локальной фиксации потенциала >>>